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產品快訊：過氧化(hua)物酶(mei)(POD)活性檢(jian)測試劑盒(he)
規(gui)格：50T/48S
注(zhu)意：正式測(ce)(ce)定之前選(xuan)擇2-3 個預期差異大的樣本做預測(ce)(ce)定。
產品內容：
提取(qu)液：液體 60mL×1 瓶(ping)，4℃保存;
試劑一：液體 60mL×1 瓶(ping)，4℃保存;
試(shi)(shi)劑二：液體 0.33mL×2 瓶，4℃保存;用時每(mei)瓶加入5mL 試(shi)(shi)劑一;用不完的試(shi)(shi)劑4℃保存一周;
試劑三：液體(ti) 10 mL×1 瓶，4℃保(bao)存(cun)。
產品說明：
POD(EC 1.11.1.7)廣泛存在于動物(wu)、植物(wu)、微生物(wu)和培養細胞中，可催化(hua)(hua)(hua)過(guo)(guo)氧化(hua)(hua)(hua)氫(qing)氧化(hua)(hua)(hua)酚類(lei)和胺類(lei)化(hua)(hua)(hua)合物(wu)，具有(you)消除(chu)過(guo)(guo)氧化(hua)(hua)(hua)氫(qing)和酚類(lei)、胺類(lei)毒性的雙重作用。POD 催化(hua)(hua)(hua) H2O2 氧化(hua)(hua)(hua)特(te)定(ding)底物(wu)， 在470nm有(you)特(te)征光吸收(shou)。
需自備的儀器和用品：
可見(jian)分光光度(du)計、臺式離心(xin)機(ji)、可調(diao)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰(bing)和(he)蒸餾水
過(guo)氧化物酶(POD)活性(xing)檢(jian)測(ce)試劑盒(he)操作步(bu)驟：
一、粗酶液(ye)提(ti)取：
1、 細菌、細胞或組織樣品的制備：
細(xi)菌(jun)(jun)或(huo)(huo)培養細(xi)胞(bao)(bao)：先收集細(xi)菌(jun)(jun)或(huo)(huo)細(xi)胞(bao)(bao)到離(li)心管內，離(li)心后棄上(shang)清;按(an)照細(xi)菌(jun)(jun)或(huo)(huo)細(xi)胞(bao)(bao)數(shu)量(liang)(104 個)：提(ti)取(qu)液(ye)體積(ji)(mL)為 500~1000：1 的比例(建(jian)議500萬細(xi)菌(jun)(jun)或(huo)(huo)細(xi)胞(bao)(bao)加入1mL 提(ti)取(qu)液(ye))，超聲(sheng)波破碎(sui)細(xi)菌(jun)(jun)或(huo)(huo)細(xi)胞(bao)(bao)(冰浴，功(gong)率 20%或(huo)(huo) 200W，超聲(sheng) 3s，間隔 10s，重復 30 次(ci));8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上(shang)清，置冰上(shang)待測。
組織：按照組織質量(g)：提取(qu)液體積(ji)(mL)為(wei) 1：5~10 的比例(建(jian)議稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組織，加入
1mL 提取液)，進(jin)行冰(bing)浴(yu)勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上(shang)清，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測。
2、 血清(漿)樣品(pin)：直接檢(jian)測。二、測定步驟：
1、分光光度(du)計預(yu)熱30min 以上(shang)，調節(jie)波長至470nm，蒸餾水調零。
2、測定前(qian)將試劑一、二和三(san) 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它(ta)物種(zhong))放置10min。
3、樣本測定表
試劑名稱(µL)測(ce)定(ding)管
樣本15
蒸餾水270
試劑一520
試劑二130
試劑三135
在1mL玻璃比色皿中按順序(xu)加入上述試(shi)劑(ji)，立(li)即混勻并計(ji)時(shi)，記(ji)錄470nm下30s 時(shi)的吸光值(zhi)
A1和1min30s后的吸光值A2。計算(suan)ΔA=A2-A1。
注意：
a.若一次性測定(ding)(ding)樣(yang)本較多，可將試劑一、二、三和(he)蒸餾水按比例配成混(hun)合液(ye)，在 37℃(哺乳動物) 或 25℃(其它物種)放置10min 以上，測定(ding)(ding)時加(jia)入15µL 樣(yang)本和(he)1055µL 混(hun)合液(ye)測定(ding)(ding)。
b.如果ΔA 小于0.005，可將(jiang)反應時(shi)間延長(chang)到5min。如果ΔA 大(da)于0.5，可將(jiang)樣本用提取液稀釋后測定，計算公式中(zhong)乘(cheng)以(yi)相應稀釋倍數。
三、POD 活性計算：
1、 血清(漿)POD 活性
單位(wei)定義(yi)：每mL血清(漿)在每mL 反應體系中(zhong)每分鐘A470 變(bian)化0.01 為一個酶(mei)活力單位(wei)。計算(suan)公式：POD(U/mL)=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =7133×ΔA
2、 組織、細菌或細胞 POD 活性
(1)按樣本蛋白濃度(du)計算
單(dan)位(wei)定義：每(mei)mg組織蛋白(bai)在每(mei)mL反應(ying)體系中每(mei)分(fen)鐘(zhong)A470變化0.01為一個酶活力單(dan)位(wei)。
POD(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位(wei)定義：每(mei)g組織(zhi)在每(mei)mL反應體系中每(mei)分鐘A470變化0.01為一個(ge)酶(mei)活力(li)單位(wei)。
POD(U/g鮮重)=ΔA×V反總(zong)÷(W×V樣÷V樣總(zong))÷0.01÷T =7133×ΔA÷W
(3)按(an)細菌或(huo)細胞(bao)數(shu)量(liang)計(ji)算
單位(wei)定(ding)義：每(mei)1萬個細菌或細胞在每(mei)mL反應體系中每(mei)分鐘 A470 變(bian)化(hua)0.01為一個酶活力單位(wei)。
POD(U/104 cell)=ΔA×V反總(zong)÷(500×V樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷0.01÷T=14.27×ΔA
V反(fan)總：反(fan)應體系總體積(ji)(ji)，1.07mL;V樣：加入(ru)樣本體積(ji)(ji)，0.015mL;V樣總：加入(ru)提取液體積(ji)(ji)，1mL;T：反(fan)應時間，1min;Cpr：樣本蛋白質濃(nong)度，mg/mL;W：樣本鮮(xian)重，g;500：細(xi)菌或(huo)細(xi)胞總數(shu)，500萬。
過(guo)氧化(hua)物酶試劑(ji)盒本(ben)(ben)生一(yi)直視(shi)質(zhi)量控(kong)制為企(qi)業(ye)的生命，追求企(qi)業(ye)競爭力(li)的不斷提升(sheng)。公司在經營(ying)中始終秉承：遵紀守法，嚴于(yu)(yu)律己，寬仁以待，敢于(yu)(yu)承擔的企(qi)業(ye)精神作(zuo)(zuo)為標準，以過(guo)硬(ying)的質(zhi)量和(he)優良的服務來維護和(he)拓展市(shi)場，較大限度的滿(man)足客(ke)戶的需(xu)求。與客(ke)戶的共贏，是我們的發展目標。本(ben)(ben)生!您信任的合作(zuo)(zuo)伙伴。我們愿(yuan)與您真誠合作(zuo)(zuo)，共創(chuang)美好的未來。
