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“elisa試劑盒"常(chang)見的問題及(ji)解答
問：抗(kang)原檢測出的分子量比資料上的大，是怎(zen)么(me)回事(shi)?
答：a)抗(kang)原形成了(le)二聚體。增多巰基(ji)乙醇(chun)量，煮沸(fei)變性時間延長，可(ke)以打開二聚體。b)蛋白本身的修飾如：糖基(ji)化(hua)，磷酸化(hua)等。
問：蛋白(bai)轉(zhuan)移(yi)不到膜上，但膠(jiao)上有，同時Marker 轉(zhuan)上去了，為什(shen)么?
答：可能是：a)樣品濃度過低;b)轉移時間不夠。
問：磷酸化抗體的檢測樣本制備時是否一定要(yao)加NaF等?
答：NaF是一(yi)種(zhong)廣譜(pu)磷酸化酶的抑制(zhi)劑，一(yi)般加。但是不加也可以，大部分時候是不用加的。
問：要(yao)(yao)驗證某個細胞上有(you)無該(gai)蛋(dan)白的存在，需(xu)要(yao)(yao)做(zuo)免疫組化和western blot試驗嗎?做(zuo)這兩個試驗時的一抗和二抗可以共用(yong)嗎?
答(da)：①免疫(yi)組化(hua)可(ke)(ke)以(yi)用來進(jin)行定(ding)位，但(dan)是不(bu)能(neng)定(ding)量，而且有(you)時會有(you)假陽(yang)性，不(bu)易與背景區(qu)分;Western blot可(ke)(ke)以(yi)特(te)異性檢測(ce)某(mou)個蛋白質分子，進(jin)行定(ding)量，但(dan)是不(bu)能(neng)定(ding)位。
②兩種實(shi)驗的一抗有時(shi)(shi)候(hou)不能通用，公(gong)司的產品說(shuo)明一般都會說(shuo)明可(ke)以進行(xing)什么實(shi)驗，在(zai)免疫(yi)組化時(shi)(shi)，是否適合石蠟切片或者冰凍切片。
問：做Western Blot時，提取蛋白(bai)(bai)后凍存(未加(jia)蛋白(bai)(bai)酶抑制劑(ji))，用的(de)博(bo)士德的(de)一(yi)抗(kang)，開(kai)始還有點痕跡(ji)，現(xian)在越來越差，上樣量已(yi)加(jia)到(dao)120μg，換了個santa cloz的(de)一(yi)抗(kang)仍不行(xing)。是什(shen)么原(yuan)因?蛋白(bai)(bai)酶抑制劑(ji)單加(jia)PMSF行(xing)嗎?
答：懷疑是樣品(pin)(pin)問題，可(ke)能(neng)是：1，樣品(pin)(pin)不(bu)能(neng)反(fan)復凍融;2，樣品(pin)(pin)未加蛋(dan)白酶抑制劑。同時，建議(yi)檢查(cha)Western Blot過程(cheng)，提高一抗濃度。對于(yu)加蛋(dan)白酶抑制劑來說，一般加PMSF就(jiu)可(ke)以了(le)，能(neng)多加幾(ji)中種(zhong)蛋(dan)白酶抑制劑。
問(wen)：細胞水平(ping)要做western blot，多少(shao)細胞提的蛋白夠做western blot?
答(da)：一般(ban)5×10^6就足(zu)夠了
問：同一樣(yang)品能同時提RNA又(you)提蛋白么?這樣(yang)對western blot有無影響?
答：能，沒(mei)有(you)問題。
問：同一蛋白(bai)樣(yang)品能同時進行(xing)兩種因子的Western Blot檢測嗎?
答：當然(ran)可以，有的甚至(zhi)可以同(tong)時測幾十種樣(yang)品。
問：如果(guo)目(mu)標蛋(dan)白(bai)是膜蛋(dan)白(bai)或是胞漿蛋(dan)白(bai)，操作需要注意什(shen)么(me)?
答：如果是膜(mo)蛋白和(he)(he)胞漿蛋白，所用(yong)的(de)(de)去(qu)垢劑(ji)要(yao)溫(wen)和(he)(he)得多，這時加上NaF去(qu)抑制(zhi)磷(lin)酸化酶的(de)(de)活性。
問：我的樣品的蛋(dan)白含量很低，每微升不到1微克，但是(shi)在(zai)轉(zhuan)膜時經(jing)常會(hui)發現(xian)只有(you)一部分蛋(dan)白轉(zhuan)到了膜上，就是(shi)在(zai)轉(zhuan)膜后染膠發現(xian)有(you)的孔所有(you)的蛋(dan)白條帶都在(zai)，只是(shi)顏色(se)變(bian)淡了，有(you)什(shen)么(me)辦法可以解決?
答：你(ni)可以加大上(shang)樣量，沒(mei)有(you)問題，還有(you)轉移時你(ni)可以用減少電流延長時間，加20%甲(jia)醇。
ELISA試(shi)劑盒(he) 本生(sheng)(sheng)一(yi)直視質量控制(zhi)為(wei)企業(ye)(ye)的生(sheng)(sheng)命，追求企業(ye)(ye)競爭(zheng)力(li)的不斷(duan)提(ti)升。公司在經營中始終(zhong)秉(bing)承：遵(zun)紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(ye)(ye)精神(shen)作為(wei)標準，以過(guo)硬的質量和優(you)良的服(fu)務(wu)來維護和拓展市場(chang)，較大限度的滿足(zu)客戶(hu)的需求。與客戶(hu)的共贏，是我們的發展目標。本生(sheng)(sheng)!您信任的合作伙伴。我們愿(yuan)與您真(zhen)誠(cheng)合作，共創美好的未來。
