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　　BUNSEN本生分(fen)享(xiang)：熒光定量PCR耗材的選擇

　　PCR是分子生物(wu)學研究(jiu)的基礎(chu)實驗(yan)，用于在短時間內將單拷(kao)貝(bei)(bei)的目標DNA序列擴增至(zhi)數百(bai)萬拷(kao)貝(bei)(bei)。除(chu)了選(xuan)擇(ze)可靠的PCR儀外，用于PCR反(fan)應(ying)的塑料耗(hao)材(cai)除(chu)考慮兼容性(xing)，還要(yao)求避(bi)免存在污染物(wu)和抑制劑，同時又具(ju)有(you)可保障(zhang)最佳PCR效果的高質量。因此，如何(he)選(xuan)擇(ze)作為(wei)用戶(hu)，了解(jie)如何(he)選(xuan)擇(ze)PCR / qPCR耗(hao)材(cai)，顯(xian)得尤其重要(yao)。

　　第一步(bu)，選擇通(tong)量

　　根據樣品(pin)數量選擇通(tong)量，PCR耗(hao)材的最常見(jian)規格為(wei)：

　　管：0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL

　　96 孔(kong)板：0.2 mL, 0.1 mL

　　384 孔板：0.02 mL

　　單管

　　8聯管

　　96孔板

　　384孔板

　　第二步， 選擇加樣體積：不(bu)同(tong)類型管(guan)，可(ke)供(gong)選擇的(de)容量(liang)體積不(bu)同(tong)。

　　單管: 0.5 mL, 0.2 mL(標準), 0.1 mL(低容(rong)，或(huo)稱快速(su))

　　8聯管： 0.2 mL(標準(zhun)), 0.1 mL(低(di)容，或稱快速)

　　96 孔板：0.2 mL(標(biao)準), 0.1 mL(低容，或(huo)稱快(kuai)速)

　　384 孔板(ban)：0.02 mL

　　“(低容(rong))"意味著高度更(geng)低。 低容(rong)耗材更(geng)短的設計(ji)程度減(jian)少了反應體系上方的空間(jian)，降低了蒸發的影響并(bing)提高了熱傳導效率(lv)，因此也被(bei)稱為“快(kuai)速"管或板。

　　第三(san)步， 對于PCR板的選(xuan)擇，需(xu)要進一(yi)步根據實驗類型和儀器選(xuan)擇裙邊、切割角、顏色等。

　　3.1裙邊(bian)： 根(gen)據儀器加熱模塊類型選擇

　　無裙邊:

　　兼(jian)容絕大多(duo)數PCR儀和實(shi)時PCR儀的模(mo)塊，易于剪裁，但不適用于自(zi)動化應用。

　　半裙邊：

　　板的邊(bian)緣周圍具有短(duan)的邊(bian)緣，加熱或(huo)移液(ye)過程(cheng)中提(ti)供足夠的支撐，不宜變形(xing)彎曲

　　全裙邊：

　　有覆蓋板(ban)高(gao)度的邊緣，適用于自動化(hua)操(cao)作

　　3.2顏色： 透明或白色

　　PCR板通常提供透(tou)明、磨砂或白色(se)(se)不同的(de)顏色(se)(se)形(xing)式，以(yi)(yi)適用(yong)于不同類型PCR反應。在(zai)實時(shi)PCR的(de)反應時(shi)，與(yu)透(tou)明耗(hao)材相比，我們更(geng)推薦使用(yong)白色(se)(se)塑(su)料耗(hao)材，以(yi)(yi)實現靈敏(min)和準確的(de)熒光(guang)檢測。

　　白(bai)色耗材通過阻(zu)止熒(ying)光折(zhe)射(she)(she)出管(guan)來提(ti)高qPCR數據的(de)靈(ling)敏(min)度和一(yi)致性。折(zhe)射(she)(she)被最小(xiao)化時，更多的(de)信(xin)號被反(fan)射(she)(she)回檢(jian)測器(qi)，從(cong)而(er)增加(jia)信(xin)噪(zao)比(圖B)。此外，白(bai)色管(guan)壁可阻(zu)止熒(ying)光信(xin)號傳遞至PCR儀模塊，避免被吸(xi)收或不一(yi)致地反(fan)射(she)(she)熒(ying)光信(xin)號，從(cong)而(er)使重復(fu)實驗中的(de)差異降至低(di)。在極少數情況下(xia)，如果熒(ying)光探測器(qi)由于白(bai)色孔(kong)(kong)的(de)信(xin)號反(fan)射(she)(she)增強而(er)過飽和，可以使用磨砂(sha)孔(kong)(kong)替代。

　　3.4 切角

　　切(qie)角(jiao)是對PCR板(ban)的(de)一個角(jiao)缺失，取決于所需(xu)要適配的(de)儀器。切(qie)角(jiao)可(ke)能位于96孔(kong)(kong)板(ban)的(de)H1，H12或A12位置，或384孔(kong)(kong)板(ban)的(de)A24位置

　　3.5品牌選擇

　　市場上有許多品(pin)牌和(he)廠(chang)家提供PCR耗(hao)材，選擇時需要考慮哪些(xie)因素呢? PCR耗(hao)材品(pin)質由包括原料(liao)、無污(wu)染、一致性(xing)等決(jue)定。

　　1. 原料(liao)：Thermo Scientific選用(yong)優質的全新醫用(yong)級聚(ju)丙烯原料(liao)

　　2. 生(sheng)產環節：十萬級(ji)潔凈車間生(sheng)產，無RNase、DNase和外(wai)源(yuan)DNA污染(ran)

　　3. 批間一致性：遵(zun)循(xun)嚴格的生產(chan)標準和檢測標準，由資深專家使用的設備進(jin)行生產(chan)，確(que)

　　保批間一致性(xing)和可(ke)追溯性(xing)，確(que)保用(yong)戶(hu)獲得可(ke)靠PCR實驗數(shu)據。

　　第四(si)步，選擇(ze)正確的(de)PCR膜

　　PCR板選(xuan)好后，還(huan)需要(yao)選(xuan)擇一張好的PCR膜來密(mi)封，才能保證獲得(de)準確可(ke)靠的PCR數據，這(zhe)對實時PCR尤其重要(yao)!

　　我們的(de)Thermo Scientific™ Absolute™ qPCR粘(zhan)(zhan)性封口(kou)膜(貨號AB1170)產(chan)品采用壓力(li)敏感密(mi)封設(she)計。只(zhi)有在施(shi)加(jia)壓力(li)的(de)情況下，這(zhe)種非(fei)粘(zhan)(zhan)性粘(zhan)(zhan)合產(chan)品才可以(yi)粘(zhan)(zhan)合到孔(kong)的(de)邊緣上(shang)。其只(zhi)在需要(yao)粘(zhan)(zhan)合的(de)位置(zhi)產(chan)生良好(hao)的(de)密(mi)封效果，使孔(kong)開(kai)口(kou)位置(zhi)變得超(chao)透明，實現的(de)熒光信號傳輸。

　　強效壓敏粘附(fu)，可產生牢固的粘合效果，以(yi)盡量(liang)減(jian)少蒸發，使每(mei)個樣本保持(chi)較(jiao)高的PCR效率

　　其光學透明度可用于qPCR及其他熒光應用

　　一(yi)致的封口厚(hou)度和(he)透明度，確保整塊板信號傳輸相等(deng)

　　可剝離(li)，剝離(li)后平板上無粘性殘留

　　膜兩(liang)端無粘(zhan)性，輕松進行密封(feng)和(he)去除操作

　　適用溫度范(fan)圍(wei)：–80°C至110°C

　　PCR耗材 本生一直(zhi)視質量控制為企(qi)業的(de)(de)生命，追求(qiu)企(qi)業競爭力的(de)(de)不(bu)斷提升(sheng)。公司在經營(ying)中始終(zhong)秉承：遵紀守法(fa)，嚴于律己，寬仁(ren)以待，敢于承擔的(de)(de)企(qi)業精(jing)神作(zuo)(zuo)為標(biao)準，以過硬(ying)的(de)(de)質量和優良的(de)(de)服務來(lai)維護(hu)和拓展市場(chang)，較大限(xian)度的(de)(de)滿(man)足客戶(hu)的(de)(de)需求(qiu)。與(yu)客戶(hu)的(de)(de)共(gong)贏，是我們的(de)(de)發展目標(biao)。本生!您信任的(de)(de)合作(zuo)(zuo)伙(huo)伴。我們愿與(yu)您真誠合作(zuo)(zuo)，共(gong)創美好的(de)(de)未來(lai)。